保存：短期使用可4℃儲(chǔ)存，長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃。

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。

操作步驟：

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱(chēng)取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次；有未研磨開(kāi)的組織，可用雙層紗布過(guò)濾。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×10⁷個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50μL Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。

4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。

5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)：

1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核，務(wù)必做到：第一，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備細(xì)胞核的最關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。

3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。

轉(zhuǎn)速與離心力換算: G=1.11×10^-5×R×(rpm)²

G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來(lái)表示;[rpm]²即：轉(zhuǎn)速的平方;R為半徑，單位為厘米。

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標(biāo)題:Enhance Mitochondrial Damage by Nuclear Export Inhibition to Suppress Tumor Growth and Metastasis with Increased Antitumor Properties of Macrophages

成員:Yuan Yao, Jing Tao, Jiayan Lyu, Cheng Chen, Yuan Huang, Zhou Zhou

論文因子:10.383 發(fā)表期刊:ACS Applied Materials & Interfaces pmid:37079389

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標(biāo)題:New Findings: Hindlimb Unloading Causes Nucleocytoplasmic Ca2+ Overload and DNA Damage in Skeletal Muscle

成員:Huajian Yang, Huiping Wang, Fangyang Pan, Yuxi Guo, Liqi Cao, Wenjing Yan, Yunfang Gao

論文因子:7.666 發(fā)表期刊:Cells pmid:37048150

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標(biāo)題:Self-Propelled Proteomotors with Active Cell-Free mtDNA Clearance for Enhanced Therapy of Sepsis-Associated Acute Lung Injury

成員:Weichang Huang, Lihong Wen, Hao Tian, Jiamiao Jiang, Meihuan Liu, Yicheng Ye, Junbin Gao, Ruotian Zhang, Fei Wang, Huaan Li, Lihan Shen, Fei Peng, Yingfeng Tu

論文因子:15.1 發(fā)表期刊:Advanced Science pmid:37518854

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標(biāo)題:OTUB1 promotes osteoblastic bone formation through stabilizing FGFR2

成員:Xiuqin Yang, Xiaohan Zhang, Zewei Yang, Qian Zhang, Wanjun Hao, Yu Pang, Dongjie Zhang, Di Liu

論文因子:5.5 發(fā)表期刊:Biomolecules pmid:37509093

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標(biāo)題:The small nucleolar RNA SNORA51 enhances breast cancer stem cell-like properties via the RPL3/NPM1/c-MYC pathway

成員:Shan Li, Zining Jin, Xinyue Song, Jinfei Ma, Ziqi Peng, Hao Yu, Jian Song, Yiqi Zhang, Xiaoyu Sun, Miao He, Xinmiao Yu, Feng Jin, Ang Zheng

論文因子:4.6 發(fā)表期刊:MOLECULAR CARCINOGENESIS pmid:38421204

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

細(xì)胞核提取試劑盒

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