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Solarbio 通用RT-PCR試劑盒（M-MLV）

操作步驟：

一、反轉(zhuǎn)錄反應

1、在冰浴的無 RNase 的離心管中加入如下反應成分： 1-5ug 總 RNA 或 50-500ng mRNA 2ul Oligo(dT)16或 2 pmole 基因特異性引物補 RNase-free ddH2O 14.5ul

2、70℃保溫 5min 后迅速在冰上冷卻 2min，簡短離心收集反應液后加入以下各組分： 4ul 5×M-MLV Buffer 1ul dNTPs 0.5ul RNasin 1ul M-MLV

3、42℃溫浴 60min，如果是用隨機引物，請先將離心管置 25℃溫浴 10min，再 42℃溫浴 60min。

4、95℃加熱 5min 終止反應，置冰上進行后續(xù)實驗或-20℃保存。

5、用 RNase-free ddH2O 將反應體系稀釋到 50ul，取 2-5ul 進行 PCR 反應。

二、PCR 反應

1、按以下各組分配制 50ul PCR 反應體系： 10×PCR Buffer 5ul dNTPs 1ul 上游引物（用戶自備 10um） 1ul 下游引物（用戶自備 10um） 1ul RT 反應產(chǎn)物 2ul Taq Polymerase 0.5ul ddH2O x ul Total Volume 50ul

2、混勻后短暫離心，PCR 儀擴增，瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

注意事項：

1、 用于 cDNA 合成反應的相關試劑和耗材盡可能用 DEPC 進行處理，并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時，先用經(jīng)過滅菌的器具、水等配制溶液后，再將溶液進行過濾除菌處理。

2、 試劑盒的各組分應在-20℃保存，避免反復凍融，有效期 12 個月。

3、 RNA 樣品要避免反復多次凍融，應使 RNA 在冰浴中處于融化狀態(tài)。

Solarbio 通用RT-PCR試劑盒（M-MLV）

產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于各種 RNA 制品的反轉(zhuǎn)錄反應以及隨后的 PCR 擴增。它采用 M-MLV 進行反轉(zhuǎn)錄反應，能夠獲得較長的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。同時，在 20ul 反轉(zhuǎn)錄體系和 50ul PCR 反應體系中，還可以一次性得到足夠量的 PCR 產(chǎn)物用于后續(xù)的克隆實驗。本試劑盒中配置的酶均為進口的酶。RT 酶采用進口的 M-MLV，所以 cDNA 更長，基因的信息保留得更完整！反轉(zhuǎn)錄過程中特異的 RNase 抑制劑可有效降低由于外源 RNase 污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于 cDNA 克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。