LB培養(yǎng)基分類及倒板是什么

更新時(shí)間：2015-08-11

點(diǎn)擊次數(shù)：1768

LB培養(yǎng)基分類及倒板是什么

　　 LB培養(yǎng)基是一種培養(yǎng)基的名稱,生化分子實(shí)驗(yàn)中一般用該培養(yǎng)基來預(yù)培養(yǎng)菌種,使菌種成倍擴(kuò)增,達(dá)到使用要求.

　　 LB培養(yǎng)基分類

　　液態(tài)培養(yǎng)基

　　根據(jù)《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》（J.薩姆布魯克D.W.拉塞爾著）配制每升培養(yǎng)基,應(yīng)該在950 ml去離子水中加入:

　　胰蛋白胨10g

　　酵母提取物5g

　　NaCl 10g

　　搖動(dòng)容器直溶質(zhì)溶解.用5mol/LNaOH調(diào)pH7.0.用去離子水定容1L.在15psi高壓下蒸汽滅菌21min.

　　培養(yǎng)的菌種一般是經(jīng)過改造的無法在外界環(huán)境單獨(dú)存活和擴(kuò)增的工程菌.通過培養(yǎng)工程菌,我們可以表達(dá)大量的外源蛋白,也可以拿到帶有外源基因的質(zhì)粒,工程菌的有效擴(kuò)增是生化分子實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ).

　　 LB培養(yǎng)基的配方如下:

　　胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L

　　酵母提取物(Yeast extract) 5g/L

　　氯化鈉(NaCl) 10g/L

　　另外根據(jù)經(jīng)驗(yàn)值用NaOH調(diào)節(jié)該培養(yǎng)基的pH,使其達(dá)到7.4(該pH適合目前使用廣的原核表達(dá)菌種E.coli的生長)

　　固態(tài)培養(yǎng)基

　　 LB培養(yǎng)基1L和液體一樣，加10g~15g瓊脂粉，一定要在溫度降下之前加好抗

　　生素，并且倒好板。

　　倒板

　　1.配制：100mlLB培養(yǎng)基加入1~1.5g瓊脂粉

　　2.抗生素的加入：高壓滅菌后，將融化的LB固體培養(yǎng)基置于55℃的水浴中，待培養(yǎng)基溫度降到55℃時(shí)（手可觸摸）加入抗生素，以免溫度過高導(dǎo)致抗生素失效，并充分搖勻。

　　3.倒板：一般15ml-20ml倒1個(gè)板子。培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，打開蓋子，在紫外下照10-15分鐘。