一起來了解感受態(tài)的知識總結

更新時間：2025-11-06

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問01:	實驗中遇到TOP-10轉化后無法長出菌落
答01:	1、檢測下感受態(tài)是否有問題：在不含有抗性的平板上做個空白驗證；2、是否轉化成功？可以用別的質(zhì)粒試一下；3、42℃熱激45s或是60s試一下

問02:	高濃度時沒有抗性作用，和預期的結果不相符。以前用的是上海生工的潮霉素，相同濃度值沒有效果！
答02:	不同廠家的抗生素效價有區(qū)別，我們用大腸桿菌做抑菌實驗檢測150ug/ml可以抑菌，低濃度沒有抑菌效果。真菌的用量需要比細菌濃度高一些。（對于植物細胞，其有效濃度是20–200μg/ml；對于細菌，有效濃度是20–200μg/ml；對于真菌，有效濃度是200μg–1 mg/ml）。建議您增加一下用量。

問03:	C1100 DH5α感受態(tài)細胞我們連接產(chǎn)物做轉化涂板后不長斑，三個人做了不同的轉化都是一樣的結果
答03:	1、確認下連接條件是否合適，要注意連接產(chǎn)物搖菌時不可以加含有抗生素的培養(yǎng)基；2、用質(zhì)粒轉化試一下是否也不長菌或是做個空白對照。

問04:	你們公司幾種感受態(tài)的區(qū)別？
答04:	1、C1100 DH5菌株：克隆菌，用于分子克隆、質(zhì)粒提取?？捎糜谒{白斑篩選。 2、C1200 TOP-10菌株：克隆菌，用于分子克隆，質(zhì)粒提取。可用于藍白斑篩選。該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。 3、C1300 JM109菌株：克隆菌，用于分子克隆。一種支持帶有琥珀突變的載體生長的重組缺陷的抑制型菌株，對轉染的DNA有修飾作用而無限制作用。 4、C1400 BL21(DE3)菌株：表達菌，可用于表達非毒性蛋白。該菌株用于高效表達克隆于含有T7噬菌體啟動子的表達載體的基因。適合非毒性蛋白的表達。 5、C1500 BL21(DE3)pLysS菌株：表達菌，可表達毒性蛋白和非毒性蛋白。pLysS菌株含有pLysS質(zhì)粒，因此具有氯霉素抗性。pLysS質(zhì)粒含有表達T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾目的蛋白的表達。適合毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。

問05:	藍白斑篩選，選的是藍色的菌落還是白色的？
答05:	在含有X-gal和IPTG的篩選培養(yǎng)基上，攜帶載體DNA的轉化子為藍色菌落，而攜帶插入片段的重組質(zhì)粒轉化子為白色菌落，平板如在37℃培養(yǎng)后放于冰箱3-4小時可使顯色反應充分，藍色菌落明顯。

問06:	常用抗生素推薦使用濃度？
答06:	氨芐青霉素(Amp)：100ug/mL（細菌）；卡那霉素(kan)：10-50ug/mL（細菌）；鏈霉素(str)：10-100ug/mL；利福平（Rif）：50-100ug/mL；慶大霉素：10-50ug/mL；兩性霉素：0.25ug/mL

問07:	連接轉化效率低？
答07:	1、連接體系不合適；2、平末端不易連接，4°過夜，動作一定要輕柔；3、縮短熱激時間，改為45s；4、檢測酶是否合適（pfu擴增需單獨加ployA尾巴）

問08:	轉化后長出雜菌？
答08:	如果是單菌落周圍長出來衛(wèi)星菌落，說明培養(yǎng)時間過長，菌株老化了，對后續(xù)實驗影響不大，活化一下就好；如果是大小差不多的菌落，說明操作過程中污染了

問09:	轉化后只長出幾個菌落？
答09:	1、若果是轉化的連接產(chǎn)物或是突變產(chǎn)物正常；若是質(zhì)粒，則注意下是否操作有問題；2、有些質(zhì)粒的確轉化率低，可以換一種感受態(tài)試一下

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